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Protein isolation & separation 다운
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동물의 장기는 다른 종류의 다양한 세포군 들로부터 구성되어 있기 때문에 균일한 세포를 분리하는 것은 어려운 일이다. 적당한 배양세포가 있다면 그것을 이용하는 방법도 생각할 수 있지만, 세포배양으로는 양적인 제한과 경재성이 문제가 된다. 여기에서는 비교적 균일한 세포가 많은 조직으로부터 세포 소기관의 분획에 대하여 설명하고자 한다. 목적한 단백질의 장기분포와 세포내의 소재가 확실하지 않은 경우에는 여러 가지 조직을 파괴해서 그 세포 소기관을 분획하는 것이 기본적으로 필요하다. 또한 목적 단밸질을 정제할 경우에는 세포를 분획 하여 함량이 많은 부분의 조직을 알 필요가 있다. 파괴와 분획함에 있어서 조제후에도 목적단밸질의 기능이 안전하게 유지 되어야하는 것과 단밸질의 함유량과 순도가 높은 것이 중요하다.
① 기본적인 주의점
- 세포분획을 보다 정확하게 하기 위하여서는 동결 표준품보다 신선한 재료를 신속하게 저온하해서 파괴하는 것이 중요하다. 또한 세포성분이 응집하지 않는 용매로 단백질의 기능이 유지되어지는 조건을 이용하여야 한다. 특히 homogenizer등의 유리관을 취급할 때 손이 미끄러지지 않도록 고무장갑 등을 착용하는 것을 권장한다. 더욱이 원심분리기, 초원신 분리기 등을 조작 할 때는 원심간의 balance를 정확히 맞추고 rotor의 뚜껑을 확실하게 잠그는 등 엄중한 주의를 기울여서 실험의 안전성을 고려하기 바란다.
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