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단백질 분리와 전기 영동
1) 전체 세포단백질(whole cellular extract)의 분리 실험방법 1. 단층으로 자란 배양세포를 1 ml의 PBS로...
1) 전체 세포단백질(whole cellular extract)의 분리
실험방법
1. 단층으로 자란 배양세포를 1 ml의 PBS로 두번 세척한다.
2. 배양접시에 붙은 상태로 얼음에 올려놓고 300 ml의 용해용액(RIPA 용액: 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% DOC[deoxycholic acid], 0.1% SDS, 50 mM Tris-Cl, pH 7.5)을 가한다.
3. 30분간 가끔씩 흔들면서 얼음에 둔다.
4. 1 ml pipette을 사용하여 수차례에 걸쳐 lysate를 올렸다, 내렸다를 반복하여 뻑뻑하지 않을 때까지 시행하면 genomic DNA가 모두 shearing 되었다고 볼 수 있다.
5. 이 용액을 미세원침관으로 옮기고 4°C,15,000 rpm에서 10분간 원심분리한다.
6. 상층액(세포단백질)을 새 미세원침관으로 옮긴다. 이 용액은 SDS-PAGE에 이용할 수 있다.
2) 핵단백질(nuclear extract)의 분리
핵단백질의 분리는 1단계의 핵분리과정과 2단계의 단백질 분리과정으로 나눌 수 있으며, 핵을 분리하는 방법에 따라서 여러가지 방법이 있다. 순수한
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